1.常用酶的標(biāo)準(zhǔn)底物以及相關(guān)代謝工具

酶	標(biāo)準(zhǔn)底物	肝微粒體	S9	Liver cytosol
CYP1A2	Phenacetin	+	+
CYP2B6	Bupropion	+	+
CYP2C8	Amodiaquine	+	+
CYP2C9	Diclofenac	+	+
CYP2C19	S-Mephenytoin	+	+
CYP2D6	Dextromethorphan	+	+
CYP2E1	Chlorzoxazone	+	+
Glutathione Transferase (GST)	1-chloro-2,4-dintrobenzene		+
Sulfurotrnasferase (SULT)	7-hydroxycoumarin		+	+
Uridine Glucuronide Transferase (UGT)	7-hydroxycoumarin	+	+
Aldehyde Oxidase	Phthalazine		+	+

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2.貼壁肝細(xì)胞與懸浮肝細(xì)胞的區(qū)別？
答：貼壁細(xì)胞能夠在鋪了膠原的培養(yǎng)板上形成貼壁層，在換液操作時能夠保留在培養(yǎng)板的孔內(nèi)。主要適用于需要多次換液，較長時間培養(yǎng)的試驗，如誘導(dǎo)，轉(zhuǎn)運體，HBV感染等。懸浮細(xì)胞是沒有貼壁能力的細(xì)胞，適合短時間實驗（小于5小時），如代謝穩(wěn)定性，代謝產(chǎn)物鑒定，肝細(xì)胞攝取等試驗。
 
3.肝細(xì)胞解凍操作步驟？
答：原代肝細(xì)胞在解凍時采取快融的策略。用鑷子等工具從液氮中拿出細(xì)胞后要首先在空氣中放置幾秒鐘讓液氮揮發(fā)，防止驟然升溫造成液氮噴出傷人或管壁裂開。再放入37°C中水浴約70-90秒，觀察到凍存管內(nèi)的細(xì)胞將要化凍還沒有成為液體時停止水浴最佳。IVT原代貼壁肝細(xì)胞無需離心處理，直接加入到plating media鋪板即可。
 
4.該如何在肝細(xì)胞或微粒體中選擇體外代謝工具？
答：藥物通過肝細(xì)胞色素P450代謝是其主要的代謝途徑。微粒體含有全部CYP代謝酶能夠良好地預(yù)測體內(nèi)代謝的情況，方便試驗與購買，是體外代謝研究的首選工具。肝細(xì)胞因其具有完全的細(xì)胞代謝功能，可以做微粒體代謝的補(bǔ)充。但是在做需要完全細(xì)胞生理功能的試驗（如誘導(dǎo)，轉(zhuǎn)運體等）時需要選擇肝細(xì)胞作為研究工具，是微粒體所不能替代的。
 
5.供體數(shù)和酶活不同的微粒體怎么選擇？
答：為消除試驗材料的個體差異，將多供體混合在一起。參考FDA指導(dǎo)原則，在相關(guān)性分析法研究藥物代謝表型時可以選擇10個不同的供體進(jìn)行試驗，所以在一般的代謝或抑制試驗中可以選擇10個以上供體的微粒體均可進(jìn)行研究。
另外，做代謝穩(wěn)定性（Stability）實驗以及代謝產(chǎn)物鑒定（MedID）實驗，推薦使用高酶活（H-class）的微粒體，做CYP450抑制實驗，建議用普通酶活的微粒體。
 
6.微粒體如何進(jìn)行分裝保存？
答：微粒體一次實驗用不完需要分裝保存的，建議化凍時候不要稀釋，直接將原液在冰上進(jìn)行分裝，將不用的部分寫好標(biāo)簽凍存在-80°C冰箱中。
 
7.微粒體能凍融多少次？
答：微粒體一般凍融5次以內(nèi)不影響質(zhì)量。
 
8.重組酶有高活性和低活性的有什么區(qū)別？實驗時該如何選擇？
答：高活性的重組酶代謝速率較大，一般在較短的時間內(nèi)（如10min）代謝速率與孵育時間成線性。低活性重組酶在較長時間內(nèi)（如1h）具有良好的代謝速率與孵育時間成線性。低活性的重組酶更接近體內(nèi)環(huán)境。
 
9.重組酶有+B5的，有不加b5的，有什么區(qū)別？
答：微粒體上天然水平的CYP 亞酶，在生理狀態(tài)下發(fā)生催化作用時伴隨生理水平的細(xì)胞色素b5，以及NADPH-CYP 還原酶的輔助。為模擬生理狀態(tài)，在克隆代謝酶亞基因時會考慮同時克隆細(xì)胞色素b5 和還原酶。這并不是發(fā)生催化反應(yīng)的必需條件，且不影響實驗結(jié)論。
 
10.培養(yǎng)液保質(zhì)期多久？加了抗生素以后？
答：培養(yǎng)液在4°C冰箱中可以放3個月。加入抗生素后貨架期為7天 。

以上信息僅供參考
在做實驗之前，預(yù)先按照技術(shù)規(guī)范檢驗產(chǎn)品質(zhì)量。在產(chǎn)品開始使用之后，買方對應(yīng)用及其結(jié)果負(fù)有全部責(zé)任。若有質(zhì)量異議，買方需在收到貨物后10個工作日內(nèi)書面通知賣方，過期無效。